A leaky mutációk két fő tipusba tartoznak. Az egyik a gyengített promóter típusú mutáció, a másik pedig  a kazettás mutagenezis során tapasztalt új transzlációs iniciációs pont kialakulása. Ez utóbbi is valós veszély, olyannyira, hogy számos E.coli KO-ról derült ki, hogy valójában nem is KO.

 

Az egyetlen biztos módszer a gén teljes eltávolítása a genomból. Ezért a loss-of-function típúsú mutációkra a legbiztosabb módszer a KO előállítás, amely már a főbb modellorganizmusokban (E.coli, S. cerevisiae, M. musculus. C. elegand, D. melanogaster, A. thaliana?) megoldott.

 

Az RNAi módszer előnye, hogy olcsó, és gyorsan kivitelezhető.

 

Esszenciális gének vizsgálatára azonban a LoF mutációk alkalmatlanok.

 

"En zebradanion dolgozom, es a morpholinok hasznalata teljesen elfogadott, bevett modszer; a termeszetes mutaciok nagy resze 100%-osan masolhato, raadasul sokkal egyszerubb az anyai "uzenet" hatasat vizsgalni, mint idoigenyesen eloallitani egy "anyai-zigotikus" vonalat, ami fenntartasa kulonosen trukkos lehet, bar ketsegtelen, hogy megvannak a maga elonyei."

 

A zebrahalon valójában csak a gének egy kis részét tudod vizsgálni az RNAi módszerrel. Ne tévesszen meg az, hogy valójában te zömmel olyan géneket vizsgálsz, amelyek vizsgálatára alkalmas az RNAi technológia. Gondolom developmental biology. A "developmental" gének azonban csak csepp a genom géntengerében.

 

A LoF mutációk azonban sokszor nem hasznosak. A GoF típúsú mutációk tanulmányozásával sokszor sokkal tovább lehet jutni a gén funkciójának megismerésében. Ilyen mutcáiók előállítására viszont leginkább a pontmutációkat okozó ágensek (kémiai szerek, esetleg UV) alkalmasak, amelyek nem csak az információ mennyiségét, hanem annak minőségét is megváltoztatják.

 

A mutagenezis nem macerás, de a mutánsok térképezése iszonyú idő és pénzigényes még a modern módszerekkel is.

""Olyan sokba kerülnek ezek, hogy ilyesmit gyakorlatilag csak nagy országok nemzeti szintű projektjei tudnak felvállalni. Több ilyen mutagenezis screen is zajlik ma a világban.""

"Ez eros tulzas. Nalunk az egyetemen is fut egy mutageneis project, es mindossze 4 labor osszefogasan mult. Ami kell hozza, az ido, na meg helyseg, hogy legyen hol tartani az F1, F2 es F3 nemzedekeket amig beazonositjuk a minket erdeklo mutaciokat."

 

A ti mutagenezis projektetek nem egy általános mutagenezis projekt, hanem csak mazsolázgatás. Egyszerűen létrehoztok valahány mutánst, és remélitek, hogy olyan mutációkat kaptok, amelyeket fel tudtok használni egy adott kérdés vizsgálatához.

 

De nem célotok, hogy

 

1, a genomot mutációkkal telítsétek, még egy adott típusú mutációra sem. .

2, valamennyi gén funkciójáról információt szerezzetek

 

Én természetesen ez utóbbi típusú screenekre gondoltam.

 

WNS